Purification and characterization of lectin from the rhizomes of curcuma amarissima roscoe - Norhameemee Kheeree (Chulalongkorn University, 2009)
ศึกษาลักษณะสมบัติของเลคตินจากเหง้าของขมิ้นดำ Curcuma amarissima Roscoe. โดยนำเหง้าของขมิ้นดำมาสกัดด้วยสารละลายทริสบัฟเฟอร์ที่ค่าความเป็นกรดด่าง 7.2 จากนั้นนำโปรตีนมาทำให้บริสุทธิ์โดยการตกตะกอนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัวที่ 80% ทำเลคตินให้บริสุทธิ์โดยใช้เทคนิคโครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพด้วยคอลัมน์ ConA Sepharose และโครมาโคกราฟีแบบเจลฟิลเตรชันด้วยคอลัมภ์ Superdex G75 ตามลำดับ เมื่อใช้เทคนิคพอลิอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟริซิสแบบเสียสภาพ ศึ่งเลคตินบริสุทธิ์ที่ได้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 32.4 กิโลดาลตัน โดยจะมีคาร์โบไฮเดรตเป็นองค์ประกอบ 33.21% และมีสมบัติในการเกาะกลุ่มกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงของหนูแรท กระต่าย และคนในหมู่เลือด A, B, AB, และ O โดยมีเสถียรภาพการทำงานที่ทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงเกาะกลุ่มกันที่อุณหภูมิต่ำกว่า 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ค่ากิจกรรมจะลดลง 50% ในช่วงอุณหภูมิ 45-85 องศาเซลเซียส และค่ากิจกรรมจะหมดไปเมื่อเพิ่มอุณหภูมิไปจนถึง 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที เลคตินมีกิจกรรมการเกาะกลุ่มกันของเม็ดเลือดแดงสูงที่สุดที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง เท่ากับ 8-11 กิจกรรมการเกาะกลุ่มของเซลล์เม็ดเลือดแดงถูกกระตุ้นได้ด้วยไอออนของแคลเซียม แมกนีเซียม และแมงกานิส และเหล็ก แต่ไอออนของปรอท โคบอลต์และอีดีทีเอ สามารถยับยั้งกิจกรรมการเกาะกลุ่มกันของเม็ดเลือดแดงได้ เมื่อวิเคราะห์กรดอะมิโนภายในของเพคตินพบว่าอยู่ในแมนโนส-กูลโคสสเปซิฟิกเลคตินแฟมิลี เลคตินที่ได้ สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราโรคพืช Fusarium oxysporum, Exserohilum turicicum , Colectrotrichum cassiicola ได้ ที่ ความเข้มข้น 17.5 ถึง 35 ไมโครกรัม และสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์สี่ชนิดคือ Bacillus subtilis, Candida albican, Escherichia coli และ Staphylococcus aureus ที่ความเข้มข้นมากกว่าหรือเท่ากับ 0.446, 0.446, 0.223, 0.892 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ เลคตินมีความเป็นพิษต่อเซลล์มะเร็งเต้านม โดยมีค่าความเข้มข้นการยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์มะเร็งที่ 50% เท่ากับ 21.2 ไมโครกรัม และค่าความเข้มข้นการยับยั้งการทำงานของแอลฟา-กลูโคซิเดสที่ 50% เท่ากับ 0.073 มิลลิกรัม