ENHANCED PRODUCTION OF L-AMINOADIPIC ACID IN Escherichia coli BY METABOLIC ENGINEERING OF LYSINE AND ADIPIC ACID BIOSYNTHESIS - Teerapat Norasetsingh (Chulalongkorn University, 2016)
กรดแอล-อะมิโนอะดิพิก (L- AAA) เป็นกรดอะมิโนที่ไม่พบในโครงสร้างของโปรตีนแต่เป็นสารตั้งต้นที่สำคัญในการผลิตสารปฏิชีวนะในกลุ่มบีตาแลกแทม รวมทั้งป็นสารตัวกลางในการผลิตยารักษาโรคสะเก็ดเงินและรูมาติซัม เนื่องจากการสังเคราะห์ L- AAA ในจุลชีพสามารถใช้แอล-ไลซีนเป็นสารตั้งต้น ดังนั้นการกลายยีนที่เข้ารหัสให้เอนไซม์ในวิถีการผลิตแอล-ไลซีนใน Escherichia coli เพื่อให้ไม่เกิดการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์แบบย้อนกลับเมื่อปริมาณแอล-ไลซีนในเซลล์เพิ่มขึ้นน่าจะส่งผลให้มีการผลิต L-AAA เพิ่มมากขึ้นด้วย งานวิจัยนี้ได้ทำการสร้าง pD-Y*D*LP ซึ่งประกอบด้วยยีนกลาย lysC ที่ตำแหน่ง V339A ของแอสพาร์โทไคเนส III และยีนกลาย dapA ที่ตำแหน่ง E84T ของไดไฮโดรไดพิโคลิเนตซินเทสซึ่งต้านทานการยับยั้งการทำงานโดยแอล-ไลซีนและยีนที่เข้ารหัสให้เอนไซม์ที่เร่งปฏิกิริยาการสังเคราะห์ L-AAA จากแอล-ไลซีน ได้แก่ ไลซีนดีไฮโดรจีเนส (lysdh) จาก Acromobacter denitrifican และไพเพอริ-เดอีน-6-คาร์บอกซิเลตดีไฮโดรจีเนส (pcd) จาก Pseudomonas putida จากการทดลองยังไม่สามารถตรวจวัดการแสดงออกและกิจกรรมของแอสพาร์โทไคเนส III และการแสดงออกของไดไฮโดรไดพิโคลิเนตซินเทสได้อย่างชัดเจน อย่างไรก็ตาม ผลจากการวิเคราะห์ L-AAA ในอาหารเลี้ยงเชื้อโดยเทคนิค HPLC และ TLC บ่งชี้ว่า ยีนกลาย lysC และยีนกลาย dapA ภายใต้โปรโมเตอร์ T7 promoter ของ pRSF-Duet1 มีผลให้มีการผลิต L-AAA เพิ่มขึ้น