Liquid chromatographic and mass spectrometric determinations of mechlorethamine-DNA crosslinks - Nutthapon Jongaroonngamsang (Chulalongkorn University, 2009)
ปฏิกิริยาครอสลิงก์ระหว่างเมคลอเรทามีนกับสายดีเอ็นเอที่ตำแหน่งคู่มิสแมตช์ไซโตซีน ถูกนำมาใช้สำหรับตรวจสอบโครงสร้างดีเอ็นเอที่มีลำดับเบส d[GCC]•d[GCC] ซ้ำกัน ซึ่งเป็นลำดับเบสที่เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคทางพันธุกรรมที่เรียกว่า Fragile X syndrome วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้ เพื่อตรวจสอบโครงสร้าง และปริมาณครอสลิงก์ระหว่างดีเอ็นเอสายคู่กับเมคลอเรทามีนที่ตำแหน่งคู่มิสแมตช์ไซโตซีนด้วยวิธีไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี และ มัลดิ-ทอฟ-แมสสเปกโทรเมตรี และ ตรวจสอบเป้าหมายของเมคลอเรทามีนบนดีเอ็นเอสายคู่ที่มีคู่มิสแมตช์ไซโตซีนด้วยวิธีการย่อยด้วยเอนไซม์ ไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี และ อีเอสไอ- แมสสเปกโทรเมตรี การตรวจสอบผลิตภัณฑ์ซึ่งเกิดจากปฏิกิริยาระหว่างเมคลอเรทามีนกับดีเอ็นเอสายคู่ที่มีลำดับเบส d[CTCACACCGTGGTTC]•d[GAACCACCGTGTGAG] (เบสที่ขีดเส้นใต้แสดงคู่มิสแมตช์ไซโตซีน) นั้นด้วยวิธีไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี และการตรวจสอบมวลโมเลกุลด้วยวิธีมัลดิ-ทอฟ-แมสสเปกโทรเมตรี แสดงให้เห็นว่าผลิตภัณฑ์ดังกล่าวเป็นสารประกอบครอสลิงก์ของเมคลอเรทามีนกับดีเอ็นเอ เมื่อย่อยสารประกอบครอสลิงก์ที่เกิดขึ้นด้วยเอนไซม์ snake venom phosphodiesterase (SVPD) และ calf intestinal phosphatase (CIP) สามารถพบผลิตภัณฑ์ที่เกิดจากการย่อยด้วยเอนไซม์จำนวน 3 ชนิด คือ dC-mechlorethamine-Cl (dC-mech-Cl), dC-mechlorethamine-OH (dC-mech-OH) และ dC-mechlorethamine-dC (dC-mech-dC) การตรวจสอบด้วยเทคนิคอีเอสไอ-แมสสเปกโทรเมตรี พบว่าเมคลอเรทามีนเกิดครอสลิงก์ระหว่างสายดีเอ็นเอที่ไนโตรเจนตำแหน่งที่ 3 ของคู่มิสแมตช์ไซโตซีน ซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ที่ตรวจสอบด้วยเทคนิค gel electrophoresis และที่สำคัญที่สุด คือ งานวิจัยนี้ประสบความสำเร็จในการพิสูจน์โครงสร้างระดับโมเลกุลของสารประกอบครอสลิงก์ของเมคลอเรทามีนกับดีเอ็นเอ